测定果胶DE公认的标准方法为化学滴定法，但此法样品用量大、操作过程复杂且费时，近年来，红外光谱作为一种快速光谱分析技术已越来越多地应用于多糖的鉴定与组成分析。其主要优点在于简便、快速、低消耗以及样品需求量少、不破坏样品等。

国内外学者已将傅立叶变换红外光谱仪FTIR作为研究多糖化学结构与性质的一种有效工具。目前国内尚无使用红外光谱法测定果胶DE的报道，本实验应用傅立叶变换红外光谱仪对果胶多糖的酯化度(DE)进行快速定量分析，并与传统的化学滴定法进行比较，研究其可行性。

实验材料、试剂和仪器

主要试剂：不同酯化度果胶标准品，Sigma公司；KBr(光谱纯)，上海试剂一厂。

主要仪器：傅立叶变换红外光谱仪。

实验材料：当归，购自无锡山禾药业有限公司，经鉴定为二级岷归。

实验方法

1、当归多糖的制备

提取：当归粉碎后，经水提、醇沉、透析、冷冻干燥得粗多糖W-ASP。水提剩下的沉淀采用50mmol·L1Na0H、0.5%的EDTA溶液室温提取，得粗多糖E-ASP。

纯化：W-ASP经DEAE—SepharoseCL-6B柱层析梯度洗脱，分别收集单一峰组分，透析，冷冻干燥得到3个纯化组分、W_ASPl，W-ASP2和W-ASP3。

2、红外光谱(FTIR)分析

将果胶标样和当归多糖测试样品干燥，真空条件下研磨成粉状。分别取果胶标样(DE64%)和测试样品微量，KBr研磨压片，采用Nicolet NexusFTIR于4000～400cm_1围内扫描。扫描32次，分辨率为4cm-1。

3、佩法测定样品酯化度(DE)

标准样品的制备：将三种已知DE分别为26%，59%，94%的果胶标样按比例配制成DE为42.5%和76.5%的果胶标样。

标准曲线的制作：分别取DE为26%，42.5%，59%，76.5%，94%的果胶标样采用FTS7000系列FTIR在4000~400cm-1范围内进行扫描。采用单次衰减全反射分析(ATR)，DTGS检测器(D1G]LAB，Randolph，MA)。扫描128次，分辨率为4cm-1，每个样品测3次，相应数值取平均值。以DE(%)为纵坐标，A1730／(A1730+A1630)为横坐标，绘制标准曲线，建立线性回归方程。测试样品W-ASP，EASP，W-ASP2及W-ASP3的操作方法同上。

4、化学滴定法测定样品酯化度

称取500mg多糖样品于锥形瓶，溶于100mL无CO2水中，滴入5滴酚酞试剂，用0.1mol·L-1标准NaOH溶液滴定样品，记录起始滴定值V1；加入10ml 0.5mol·L-1 NaOH溶液，剧烈振荡，放置15min，再加入10ML 0.5mol·L-1 HCL溶液，振荡至粉红色消失；加入3滴酚酞试剂，用0.1mol·L-1标准Na0H溶液滴定样品，记录皂化滴定值%，按公式计算DE。

傅立叶变换红外光谱法测定当归果胶多糖的酯化度结论

应用红外光谱技术建立了一种对果胶多糖酯化度(DE)进行快速定量分析的方法。DE与A1730(A1730+A1630)之间的线性回归方程(r=0.9852)表明，果胶多糖的DE与其在l730和1630cm-1处的吸收峰面积之间有良好的线性关系。将FTIR法与传统的化学滴定法进行比较，两种方法间相对误差为7％，具备良好的重现性，与传统方法相比具有样品用量少、操作简单、灵敏度高、重复性好、分析速度快等特点。

经测定，从当归中提取的果胶多糖粗品和纯品的酯化度介于42.36％～54.06％之间。FTIR测定果胶多糖酯化度具有可行性，可成为替代化学滴定法的一种的快速易行、准确的方法。